Page 403 - เอกสารประกอบการประชุมวิชาการ ศูนย์วิจัยพืชไร่ขอนแก่น ประจำปี 2563 เล่มที่ 1
P. 403
398
ื้
วัตถุประสงค์ของงานวิจัยนี้เพื่อศึกษาผลของการติดเชื้อสาเหตุโรคอื่นต่ออุบัติการณ์การตรวจพบเชอ
ี่
ิ
่
ั
ไฟโตพลาสมาโรคใบขาวในอ้อยของตวอย่างทสารวจจากไร่เกษตรกร และผลของการตดโรคอื่นตอปริมาณ
ิ
ิ
เชื้อไฟโตพลาสมาในอ้อยที่ตดเชื้อโรคใบขาวจากการปลูกเชื้อในห้องปฏบัตการ เพื่อให้ได้ข้อมูลปฏิกิริยาของ
ิ
่
ื้
ุ
่
ื้
ี่
เชอสาเหตโรคอื่นตอเชอไฟโตพลาสมาโรคใบขาวของอ้อยทสามารถน าไปพัฒนาตอเป็นสารหรือยาในการ
ควบคุมหรือก าจัดเชื้อไฟโตพลาสมาโรคใบขาวที่ได ้
วิธีด าเนินการและอุปกรณ์
์
อุปกรณ์ : อุปกรณดดจายสารละลาย เครื่องปั่นเหวี่ยง หลอดแอพเพนดอร์ฟ กระถางพลาสตก ดน
่
ู
ิ
ิ
ส าหรับเพาะกล้า เครื่องเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม เครื่องอ่านผลดีเอ็นเอ เครื่องตรวจปริมาณดีเอ็นเอ
วิธีการ :
แบ่งเป็น 2 ขั้นตอน ดังนี้
ขั นตอนที่ 1 ส ารวจและแยกและเพาะเชื้อสาเหตุโรคอื่นในอ้อยส าหรับการทดสอบ
สิ่งที่ใช้ในการทดลอง: ตัวอย่างอ้อยที่แสดงอาการโรคอื่น เช่น โรคใบลวก โรคเหี่ยว โรคใบจุด โร
คราสนิมจากการส ารวจจากแปลงปลูกของเกษตรกรในแหล่งปลูกต่างๆ
แบบและวิธีการทดลอง: ส ารวจและรวบรวมตัวอย่างอ้อยเป็นโรคจากไร่เกษตรกรและแปลงทดลอง
วิธีปฏิบัติการทดลอง
ี่
ุ
ั
่
สารวจและเก็บตวอย่างอ้อยทแสดงอาการโรคอื่น เชน โรคใบลวก โรคเหี่ยว โรคใบจด โรคราสนิม
ื้
ิ
ื้
่
ู
่
จากแปลงปลกของเกษตรกรในแหลงปลกตางๆ เพาะแยกเชอ และจาแนกชนิดของเชอในห้องปฏิบัตการ
ู
ื้
ี้
่
ึ
ื้
ื้
่
ตามวิธีการจาแนกเชอแตละชนิดและ เพาะเลยงเชอเพื่อการศกษาในขั้นตอไป ตรวจปริมาณเชอไฟโต
้
พลาสมาโรคใบขาวและการตดเชออื่นดวยเทคนิค Nested-PCR และ realtime PCR ตรวจยืนยันการตด
ิ
ิ
ื้
ื้
เชอโรคใบขาวและปริมาณเชอดวย SecA gene ตามวิธีการ Sakuanrungsirikul et al. (2013) บันทกผล
ึ
ื้
้
การตรวจพบเชื้อไฟโตพลาสมาร่วมกับการพบเชื้ออื่นในตัวอย่างเดียวกัน
่
ื้
ขั นตอนที่ 2 ศกษาผลของการตดโรคอื่นตอปริมาณเชอไฟโตพลาสมาดวยการปลกเชอใน
ู
ื้
้
ึ
ิ
ห้องปฏิบัติการ
้
ื
ี่
้
ี่
สิ่งที่ใช้ในการทดลอง: ตนอ้อยอายุประมาณ 2 เดอน ทไดจากการเพาะอ้อยทมีอาการยอดขาว
หรือหน่อขาวและจากล าที่ไม่มีอาการใบขาว
แบบและวิธีการทดลอง: -
วิธีปฏิบัติการทดลอง
เตรียมตวอย่างโดยน าอ้อยลาทมีอาการยอดขาว หรือหน่อขาวและลาทมาจากกอทไม่มีอาการใบ
ี่
ี่
ี่
ั
ขาว ตดข้อ ระบุตาแหน่งข้อ ระบุพันธุ์ทใช แชข้อในน้ าร้อน 52 องศาเซลเซียส 30 นาท น ามาเพาะใน
ี่
ั
่
้
ี
ื
้
้
ี้
ู
ู
ึ
กระถาง บันทก ตาแหน่งข้อทปลก ดแล รักษา และเพาะเลยงจนไดตนอายุประมาณ 2 เดอน บันทกข้อมูล
ี่
ึ
ื้
ื้
อาการใบขาว ตรวจปริมาณเชอไฟโตพลาสมาโรคใบขาวและการตดเชออื่นดวยเทคนิค Nested-PCR และ
ิ
้
ิ
ื้
realtime PCR ตรวจยืนยันการตดเชอโรคใบขาวและปริมาณเชอดวย SecA gene ตามวิธีการ
้
ื้
