Page 433 - เอกสารประกอบการประชุมวิชาการ ศูนย์วิจัยพืชไร่ขอนแก่น ประจำปี 2563 เล่มที่ 1
P. 433
428
ิ
ภาพที่ 14 การตรวจดีเอ็นเออ้อยที่ตดเชื้อไฟโตพลาสมาชนิดต่าง ๆ ด้วยวิธี groEL-LAMP No 1-3 : SCWL,
SCGS, SCGGS. No 4-6 : ดีเอ็นเอจากหญ้าที่เป็นโรคใบขาว และ มันส าปะหลังที่เป็นโรคพุ่มแจ ้
No.8: negative control (น้ า)
สรุปผลการทดลองและข้อเสนอแนะ
ในการพัฒนาวิธีการตรวจเชื้อโรคใบขาวแบบใหม่ด้วยเทคนิค M13-tagged two-steps-PCR ได้ท า
การพัฒนาเครื่องหมายโมเลกุลแบบใหม่โดยการประยุกตเทคนิคการตรวจลาดบเบสและการใช Tag เป็น
้
ั
์
้
M13 ซึ่งทาให้ไดวิธีการใหม่ทสามารถทดแทนวิธี nested-PCR และแก้ปัญหาของวิธีการนี้ได แตเนื่องจาก
ี่
้
่
้
M13 เป็นส่วนหนึ่งของ phage DNA จึงท าให้ได้ต าแหน่งดีเอ็นเอส่วนที่ไม่ใช่เปาหมายติดมาด้วย และในการ
ทดสอบในตัวอย่างที่มีการติดเชื้อหลายชนิด จะตรวจพบดีเอ็นเอมากกว่า 2 ต าแหน่ง ซึ่งต้องท าการแก้ปัญหา
นี้ ในส่วนของการพัฒนาเครื่องหมายโมเลกุลด้วยการใช้ยีน Imp พบว่าเป็นต าแหน่งยีนที่ยังไม่มีการรายงาน
ั
ึ
้
มาก่อนในอ้อย ดงนั้นจงทาให้การออกแบบไพร์เมอร์ทาไดคอนข้างยาก แตในการทดลองนี้สามารถพัฒนา
่
่
้
เครื่องหมายโมเลกุลสาหรับการตรวจยีนนี้ในอ้อยไดสาเร็จ แตพบปัญหาความจาเพาะของเครื่องหมาย
่
่
่
้
ี
โมเลกุลทได เนื่องจากตรวจพบตาแหน่งทไม่ใชดเอ็นเอเป้าหมายเชนกัน ซึ่งตองพัฒนาเครื่องหมายโมเลกุล
ี่
้
ี่
ู
ตาแหน่งใหม่ หรือพัฒนาสภาวะในการตรวจให้มีความเข้มสงขึ้น เพื่อให้มีความจาเพาะมากขึ้น ในการวิจัย
้
้
เบื้องตนของการพัฒนาเทคนิค LAMP พบว่ามีศกยภาพสงในการน าไปใชงาน สวน multiplex PCR นั้น
ั
่
ู
ต้องท าการตรวจความไวของวิธีการในการตรวจชนิดของเชื้อ
การน าผลงานใช้ประโยชน์
มีการเผยแพร่ผลงานวิจัย ดังนี้
้
ื้
ุ
1. การตรวจเชอไฟโตพลาสมาสาเหตโรคในอ้อยอย่างรวดเร็วดวยเทคนิค loop-mediated
ิ
ุ
isothermal amplification (LAMP) โดย ศจรัตน์ สงวนรังศริกุล วีรกรณ แสงไสย์ เบญจวรรณ รัตวัตร์
ิ
์
วิทยา ศรีภักดี รวีวรรณ เชื้อกิตติศักดิ์ และ Youichi Kobori. ใน Thailand Research Expo : Symposium
ิ
๒๐๒๐ ภาคโปสเตอร์ ในงานมหกรรมงานวิจัยแห่งชาต 2563 กทม.
