Page 428 - เอกสารประกอบการประชุมวิชาการ ศูนย์วิจัยพืชไร่ขอนแก่น ประจำปี 2563 เล่มที่ 1

423

ุ
ุ
่
้
ื้
ภาพที่ 9 กราฟแสดงคา Tm ของเชอไฟโตพลาสมาสาเหตโรคในอ้อย 3 ชนิด วิเคราะห์ดวยชดไพรเมอร์
Multiplex ที่ประกอบด้วย SCWL, SCGSและ SCGS ด้วยเทคนิค real-time PCR

ภาพที่ 10 กราฟแสดงคา Tm ของเชอไฟโตพลาสมาสาเหตโรคในอ้อย 3 ชนิด วิเคราะห์ดวยชดไพรเมอร์
่
ุ
ุ
ื้
้
้
ี่
ี
ี่
ิ้
ี่
Multiplex ทประกอบดวย SCWL, SCGS และ SCGSท ตรวจจากพลาสมิดดเอ็นเอทมีชนยีน
16S rDNA ความเข้มข้นต่างกันด้วยเทคนิค real-time PCR

้
สรุปผลการทดลอง: ไดเครื่องหมายโมเลกุลชนิด multiplex PCR จากยีน 16S rDNA ทสามารถ
ี่
ื้
่
้
้
่
แยกความแตกตางของชนิดของเชอโรคใบขาวได การทดสอบดวย Realtime PCR พบคา Tm ของเชอใบ
ื้
ื้
ื้
ขาว SCWL Tm 77.48 C เชอใบขาวร่วมกับอาการกอฝอย SCGS Tm 75.53 C และเชอกอตะไคร้
SCGSTm 79.13 C

การพัฒนาเทคนิค Loop-Mediated isothermal amplification (LAMP)
ออกแบบไพร์เมอร์ : ทาการออกแบบไพรเมอร์ (Primer) สาหรับวิธี LAMP ออกแบบไพรเมอร์ท ี่

ื้
่
จาเพาะตอเชอจากสวนของยีน16S-23S rDNA ของ phytoplasma จานวน 3 ค ศึกษาสภาวะท่เหมาะสม
ี

ู่
่

ั
ของปฏิกิริยา LAMP โดยทดสอบในอ้อยใบขาวจ านวน 7 ตวอย่าง น าไปเพิ่มจ านวนในสภาวะทเหมาะสม
ี่
ี
(optimal condition) ใน PCR tube โดยมีส่วนประกอบของสารท่เป็น final concentration คือ 0.2
µM Outer primer (F3, B3), 1.6 µM Inner primer (FIP, BIP), 0.4 µM loop primer (Loop F and