Page 444 - เอกสารประกอบการประชุมวิชาการ ศูนย์วิจัยพืชไร่ขอนแก่น ประจำปี 2563 เล่มที่ 1
P. 444
439
ุ
ิ
เป็นโรคที่มีความรุนแรงอันดบหนึ่งของประเทศไทยมาหลายสบปีจนถึงปัจจบัน ท าให้ผลผลิตในอ้อยปลูกลดลง
ั
ู
้
้
ื
่
ี่
่
ถึง 50-70% และไม่สามารถไว้ตอได ตองปลกใหม่ ซึ่งจะมีผลทตอเนื่อง คอปัญหาการขาดแคลนทอนพันธุ์ ใน
่
แปลงทเป็นโรคไม่รุนแรงเมื่อเกษตรกรใสปุ๋ยและให้น้ากับอ้อยจะทาให้อาการของโรคเห็นไม่ชดเจน เกษตรกร
ั
ี่
ยังคงเก็บเกี่ยวผลผลตไดและใช้ขยายพันธุ์ต่อไป ท าให้ปัญหาโรคใบขาวยังคงอยู่ ในการส ารวจแปลงอ้อยมักจะ
้
ิ
ี
พบโรคที่เกิดจากเชื้อแบคทเรียร่วมด้วย ได้แก่ โรคใบลวก โรคตอแคระแกร็น เกิดจากเชอโรคเน่าคออ้อย และ
ื้
ี่
่
่
โรคใบขีดแดงและยอดเน่า ซึ่งอาการของโรคนั้นแสดงแตกตางกันในแตละอาการทปรากฏ ซึ่งบางอาการของ
ุ
้
ื้
โรคนั้นเกิดร่วมกันทาให้เกิดความลาบากในการจาแนกเชอสาเหตโรค ปัจจบันโรคนั้นไดแพร่กระจายอย่าง
ุ
กว้างขวางและเพิ่มความเสียหายให้อ้อยเพิ่มขึ้นเรื่อยๆ จึงจ าเป็นต้องศึกษาการจ าแนกชนิดของเชื้อเป็นข้อมูลไว้
ื้
ี่
ั
สาหรับในการป้องกันก าจด ปัจจบันมีวิธีการจาแนกและตรวจสอบเชอสาเหตุโรคทมีความรวดเร็ว โดยเฉพาะ
ุ
้
ทางดานชวโมเลกุลให้สามารถน ามาประกอบการวินิจฉัย และสร้างความเชอมั่นในความแม่นย าและถูกตอง
้
ื่
ี
ั
เพียงพอ สาหรับการไดมาซึ่งข้อมูลสาคญในการวิเคราะห์ประกอบการเกิดโรคและการแพร่ระบาด เพื่อการ
้
้
้
ี่
ั
ี
ี่
จดการควบคมโรคทมีประสทธิภาพ เทคนิคทางชวโมเลกุลทสามารถตรวจไดรวดเร็วและแม่นย า มีอยู่ดวยกัน
ุ
ิ
ื้
หลายวิธี โดยวิธีการอาศยการตรวจหาดเอ็นเอเป้าหมายของเชอ วิธีทนิยมในปัจจบัน ไดแก่ เทคนิค PCR
้
ั
ุ
ี
ี่
ี
ื
ิ้
่
(Polymerase chain reaction) และ Real time PCR คอ วิธีการเพิ่มปริมาณชนสวนดเอ็นเอดวยปฏิกิริยา
้
้
่
ิ
ี่
ุ
ี
ลกโซ่โพลเมอเรส สามารถชวยให้ปริมาณดเอ็นเอเป้าหมายมากขึ้นอย่างรวดเร็ว ดวยชดไพรเมอร์ทมี
ู
ั่
ื้
่
ความจาเพาะตอยีนเป้าหมายของเชอ ใชเวลาใน 2 ถึง 3 ชวโมงในการเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม (Chatenet
้
et al. 2005) ปัจจุบันนิยมใช้ดีเอ็นเอไพร์เมอร์ เช่นยีน 16S RNA, 16S-23S rRNA, gyrase gene, ribosomal
protein genes และ tuf gene ซึ่งมีความจ าเพาะเจาะจงกับเชอ จากปัญหาในการใชไพรเมอร์ 16S-23S ISR
ื้
้
ี่
ในการตรวจเชอไฟโตพลาสมา เมื่อน าผลผลตพีซีอาร์ไปวิเคราะห์ดวยวิธี gel electrophoresis ผลทไดไม่
้
ื้
ิ
้
สามารถแยกความแตกตางของเชอในสกุลเดยวกันในเวลาเดยวกัน ขณะนี้ไดมีเทคนิคการวิเคราะห์การคลาย
่
ื้
้
ี
ี
เกลียวของสายดีเอ็นเอหรือเทคนิค HRM (high-resolution melting analysis) มาใช้ส าหรับตรวจหาดเอ็นเอ
ี
ั
้
ึ
ี
ี
่
เป้าหมายซึ่งดเอ็นเอเป้าหมายแตละชนิดจะมี melting temperature เฉพาะตว จงสามารถใชยืนยันดเอ็นเอ
ื้
เป้าหมายที่ต้องการได้ ดังนั้นการใช้วิธี HRM สามารถตรวจและจ าแนกเชอที่เป็นสาเหตุของลักษณะอาการของ
ั
ี
์
ู
้
ื้
้
โรคอ้อยได โดยไม่ตองวิเคราะห์ลาดบนิวคลโอไทดเพื่อพิสจน์ชนิดของเชอ ทาให้แก้ปัญหาเรื่องการจาแนก
ี่
้
ุ
อาการโรคอ้อย ทมีลักษณะที่คล้ายกันมากออกจากกันได โดยไม่ต้องใช้วิธี gel electrophoresis จึงลดตนทน
้
้
้
ิ
ุ
้
ี
ในการวิเคราะห์และลดปัญหาดานสขภาพและของเสยจากห้องปฏิบัตการได ปัจจบันนิยมใชเทคนิคนี้ในดาน
ุ
้
ื้
การแพทย์ และสัตวแพทย์ ในการจ าแนกชนิดเชอโรคที่ก่อโรคในคนและสัตว์ ส าหรับด้านเกษตรยังไม่มีการน า
้
้
่
เทคนิคมาใช และเทคนิคนี้ยังสามารถใชตรวจสอบความผดปกตของยีน และใชหาจโนไทป์ของยีนตาง ๆ ท ี่
้
ิ
ี
ิ
สนใจได้ (Wittwer et al. 2003) จึงเป็นที่มาของงานวิจัยนี้เพื่อตรวจสอบชนิดสาเหตุโรคอ้อยด้วยเทคนิค HRM
ที่มีความถูกต้อง แม่นย า เพื่อระบุชนิดของเชื้อได ้
