Page 63 - 55. Baru ok (Repaired)1 - mumu didi.doc

9.4 Uji Kualitas Dna Secara Kuantitatif

Analisis kualitas DNA secara kuantitatif dapat dilakukan dengan cara metode spectofotometry. Pada saat ini
telah banyak di rancang Spectrofotometer yang didesain khusus untuk analisa sampel DNA dan protein, dengan
demikian sampel yang dibutuhkan hanya berkisar 1 – 2 µl saja. Sebenarnya UV Vis Spectrofotometer yang
menggunakan cuvvete masih dapat digunakan, akan tetapi kelamahan dari metode tersebut harus menghitung sendiri
secara manual. Dengan menggunakan rumus

c adalah kosentrasi, Abs adalah factor pengali yang tergantung dari sampel (dapat dilihat pada tabel 1 ). Ɛ adalah
panjang gelombang (260), F adalah ketetapan nilai pada Materi genetik. p adalah Faktor pengenceran. Sedangkan l
sedangkan Path leght dalam centimeter (cm). sebagai contoh: pada cuvet micro biasanya minimal sampel yang
digunakan adalah 80 µl, dan rata rata path legh yang digunakan adalah 1 cm.

Tebel 10. Konversi nilai absorbansi ke jumlah kosentrasi

Koefisien Jumlah

DNA rantai ganda 50 ng-cm/ µl
DNA rantai tunggal 33 ng-cm/ µl
RNA 40 ng-cm/ µl

KEMURNIAN DNA
260/280

Kemurnian DNA dapat dihitung dengan menggunakan rasio absorbansi 260/280 nm. DNA dikatakan murni
biasanya ketika nilai rasio berkisar antaran 1.8-2.0. apabila nilai lebih tinggi dari 2.0 maka DNA dapat dikatakan
terkontaminasi RNA. Dan apabila rasio di bawah 1,8 maka dapat dikatakan adanya kontaminan lain seperti proten,
phenol atau lainnya yang terserap kuat pada panjang gelombang 280 nm. Penggunaan panjang gelombang 260
nmdikarenakan DNA dan RNA menyerap kuat pada panjang gelombang tersebut. Akan tetapi pada panjang gelombang
260 nm tidak dapat membedakan antara DNA dan RNA sehingga beberapa metode terus dikembangkan.

260/230
Penggunaan panjang gelombang 230 merupakan alternative kedua untuk mendeteksi adanya kontaminan
fenol. Karena fenol terserap kuat pada panjang gelombang 230 nm. Tingkat kemurnian DNA dengan menggunakan
panjang 260/230 nm lebih tinggi dibandingkan 260/280 yaitu 2.00-2.20. selain itu analisis spectral pada scanning UV
Vis Spectrofotometer atau nanodrop spectrophotometer dapat dianalisis untuk mengetahui tingkat kemurnian dan
jenis kontaminan. Grafik DNA yang murni akan kelihatan seperti pada gambar seperti pada Gambar 40. Pada gambar
41 merupakan grafik yang menandakan adanya kontaminasi EDTA

Biologi Molekular “Aplikasi Di Dunia Kesehatan”.