Page 483 - เอกสารประกอบการประชุมวิชาการ ศูนย์วิจัยพืชไร่ขอนแก่น ประจำปี 2563 เล่มที่ 1

478

วิธีด าเนินการ

สิ่งที่ใช้ในการทดลอง
1. ใบอ่อนอ้อยพันธุ์สุพรรณบุรี 50

2. อุปกรณ์และสารเคมีสาหรับเตรียมอาหารสังเคราะห์สูตรของ Murashige and Skoog (1962)
ั
3. สารควบคุมการเจริญเติบโตส าหรับชักน าแคลลส (กาญจนา และคณะ, 2560)
4. สารเคมีก่อกลายพันธุ์ 2 ชนิด คือ Thidiazuron (TDZ) และ Sodium azide (NaN )
3
5. วัสดุช าข้ออ้อย

แบบและวิธีการทดลอง
-วางแผนแบบ CRD มี 4 ซ้ า ๆ ละ 100 ขวด ความเข้มข้น 5 ระดับคือ 0, 5, 10, 15 และ 20 มิลลิกรัม
ต่อลิตร

วิธีปฏิบัติการทดลอง
1. ชักน าแคลลัส

ี่
ิ
ู
เตรียมอาหารแข็งสงเคราะห์สตร Murashige and Skoog (1962) (MS) ทเตมกรดซิตริก 150
ั
มิลลิกรัมต่อลิตร (มก./ล.) น้ าตาลซูโครส 20 กรัมต่อลิตร เติม 2,4-D (dichlorophenoxyacetic acid) 5 มก./
ั
้
ื้
ี่
ล. และน้ ามะพร้าว 10 % ปรับ pH 5.6-5.8 น าไปนึ่งฆ่าเชอดวยหม้อนึ่งความดนทปรับความดน 15 ปอนด ์
ั
ี
อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 15 นาท ตงทงไว้ในให้เยน น าใบอ่อนของอ้อยพันธุ์สพรรณบุรี 50 ทา
ั้
ิ้
ุ
็

้
่
ิ้
้
ความสะอาดดวยน้ าสะอาด และฟอกฆ่าเชอ ลางดวยน้ ากลน 3 ครั้ง ตดชนสวนใบขนาด 0.5x0.5 เซนตเมตร
ื้
ิ
ั
้
ั่
ิ้
่
ใสลงในขวดอาหารทเตรียมไว้ขวดละ 2-4 ชน น าไปวางบนชนเพาะเลยงในห้องทไม่มีแสงสว่างและควบคม
ี่
ี่
ุ
ี้
ั้
อุณหภูมิที่ 25+3 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 8 สัปดาห์ หรือจนกระทั่งได้แคลลัส
2. ชักน ากลายพันธุ์
2.1 เตรียมอาหารแข็งสังเคราะห์สูตร Murashige and Skoog (1962) (MS) ที่เติมกรดซิตริก 150
ิ
มิลลิกรัมต่อลตร (มก./ล.) น้ าตาลซูโครส 20 กรัมต่อลิตร เติม TDZ ความเข้มข้น 5 ระดับคือ 0, 5, 10, 15 และ
20 มิลลิกรัมต่อลิตร มก./ล. ปรับ pH 5.6-5.8 น าไปนึ่งฆ่าเชื้อด้วยหม้อนึ่งความดันที่ปรับความดัน 15 ปอนด ์
อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 15 นาที ตั้งทิ้งไว้ในให้เย็น ชั่งแคลลัสจากข้อ 1 0.5 กรัมต่อขวด วางลง
ในขวดอาหารสังเคราะห์ น าไปวางบนชั้นเพาะเลี้ยงในห้องที่มีแสงสว่างและควบคุมอุณหภูมิที่ 25+3 องศา
ั
เซลเซียส เปลี่ยนอาหารทุก 2 สปดาห์ อย่างน้อย 6 ครั้ง
ิ
2.2 เตรียมอาหารแข็งสงเคราะห์สตร Murashige and Skoog (1962) (MS) ทเตมกรดซิตริก 150
ั
ู
ี่
ื
ั
ิ
ิ
ิ
่
ิ
มิลลกรัมตอลตร (มก./ล.) น้ าตาลซูโครส 20 กรัมตอลตร เตม NaN ความเข้มข้น 5 ระดบคอ 0, 5, 10, 15
่
3
่
ิ
และ 20 มิลลกรัมตอลตร มก./ล. ปรับ pH 5.6-5.8 น าไปนึ่งฆ่าเชอดวยหม้อนึ่งความดนทปรับความดน 15
ี่
ั
ื้
้
ั
ิ
ปอนด์ อุณหภูมิ 121 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 15 นาที ตั้งทิ้งไว้ในให้เย็น ชั่งแคลลัสจากข้อ 1 0.5 กรัมต่อขวด
วางลงในขวดอาหารสงเคราะห์ น าไปวางบนชนเพาะเลยงในห้องทมีแสงสว่างและควบคมอุณหภูมิท 25+3
ี่
ั้
ี้
ี่
ุ
ั
องศาเซลเซียส เปลี่ยนอาหารทุก 2 สัปดาห์ อย่างน้อย 6 ครั้ง
3. ชักน าต้นอ่อน