Page 52 - 55. Baru ok (Repaired)1 - mumu didi.doc

P

erkembangan ilmu pengetahuan menuntun menuju era genomik. Sehingga segala sesuatu langsung menuju
pada inti kehidupan yaitu materi genetik. Perkembangan itu mulai di tandainya beberapa metode yang
sebelumnya tidak ada. Pemeriksaan-pemeriksaan yang memanfaatkan DNA sebagai rujukan. Hal yang paling
familiar bagi kita adalah identifikasi keturunan atau ketika ada kecelakaan pesawat terbang, korban kehatan
(mutilasi atau pencarian tersangka) maka yang menjadi primadona adalah DNA. Lalu teknologi seperti apa
yang digunakan? Pada bab ini kita akan bahas terlebih metode dasar dalam laboratorium.
Polimerase chain reaction (PCR) yang dikenalkan oleh mullis pada tahun 1983 merupakan kunci dari
semua reaksi ini. PCR secara sederhana dapat dideskripsikan sebagai metode untuk melakukan perbanyakan
atau penggandaan (amplifikasi) materi genetik pada tingkat laboratorium (in vitro). Pemanfaatan Taq
polymerase yang di isolasi dari bakteri thermofilik (bakteri yang hidup pada lingkungan panas) menjadikan
proses replikasi bisa dilakukan pada tingkat laboratorium, sehingga pada dasarnya PCR merupakan proses
rekayasa apa yang terjadi diproses replikasi dibawa ke tingkat laboratorium. PCR juga dapat digunakan
untuk mengamplifikasi RNA. Namun sebelumnya harus dilakukan pembuatan cDNA. Proses tersebut disebut
Reverse Transkriptase PCR (RT PCR).
8.2 Thermocycler dan tahapan PCR

Sesuai dengan namanya thermocycler merupakan alat yang mampu melakukan otomatisasi
perpindahan suhu. Thermo berarti suhu dan cycler yang berarti perputaran. Perputaran suhu dibutuhkan
untuk mengoptimalisasi setiap proses didalam PCR. Proses proses didalam PCR pada dasarnya adalah
denaturasi, annealing, elongasi. Namun demikian alat alat terbaru sudah dilengkapi dengan fitur fitur
menarik seperti predenaturation, post elongation, dan holding. Beberapa PCR generasi terbaru juga sudah
dilengkapi dengan gradient suhu. Dengan fitur ini para praktisi dapat melakukan optimasi pada beberapa
suhu secara bersamaan (biasanya gradient berkisar antara 3-12).

Gambar 34. Thermocycler (sumber: google/image)

Merek merek ternama juga menawarkan fitur 2D gradient. Artinya dalam satu Running
memungkinkan sejumlah sampel (96 sampel) bereaksi dengan suhu yang berbeda. Teknologi seperti ini
membuat penelitian makin mudah. Thermocycler yang baik akan menghasilkan hasil yang sama pada tiap
pengulangannya (stabil).

8.2.1 Predenaturasi

Biologi Molekular “Aplikasi Di Dunia Kesehatan”.