Page 418 - เอกสารประกอบการประชุมวิชาการ ศูนย์วิจัยพืชไร่ขอนแก่น ประจำปี 2563 เล่มที่ 1

413

ี่
้
ั้
้
การตรวจหายีนเป้าหมายใหม่ทสามารถน ามาใชยืนยันผลการตรวจ รวมทงสามารถตรวจใชวิเคราะห์แมลง
พาหะและพืชอาศัยของเชื้อไฟโตพลาสมาโรคใบขาวอ้อยทั้ง 3 ชนิดได ้

วิธีด าเนินการและอุปกรณ์

สิ่งที่ใช้ในการทดลอง
ต้นอ้อยที่แสดงอาการและไม่แสดงอาการโรคใบขาว

แบบและวิธีการทดลอง: -
วิธีปฏิบัติการทดลอง

ขั นตอนที่ 1 พัฒนาวิธีการตรวจเชื้อโรคใบขาวด้วยเทคนิค M13-tagged two steps- PCR

วิธีการดาเนินการทดลอง ออกแบบไพรเมอร์ชนิดใหม่ โดยประยุกตใช M13 ร่วมกับไพร์เมอรื
์
้
เป้าหมาย ทดสอบการเพิ่มปริมาณดเอ็นเอดวยเทคนิค two steps PCR วิเคราะห์หาสภาวะทเหมาะสม
้
ี
ี่
ตรวจผลการทดสอบดวยเทคนิคอิเลคโตรโฟริซีส ตรวจพิสจน์ชนดเอ็นเอทไดดวยการวิเคราะห์ลาดบเบส
้
ี
ิ้

้
ั
้
ี่
ู
ตรวจความจ าเพาะของเครื่องหมายโมเลกุลด้วยการทดสอบกับดีเอ็นเอของตัวอย่างใบอ้อยที่มีอาการ SCWL,
้
SCGS และ SCGGS ทตรวจพิสจน์ชนิดของเชอแลว ตรวจวิเคราะห์ลาดบเบสของชนดเอ็นเอทไดจากการ
ี่
ี่
้
ั
ื้

ู
ี
ิ้
ี่
้
้
ื้
ี
ู
ี
ิ้
ตรวจดวยเชอทง 3 ชนิด ตรวจความไวของวิธีการดวยการเจอจางพลาสมิดดเอ็นเอลกผสมทมีชนดเอ็นเอ
ั้
ื
ี่
ิ
ี
ั
้
เป้าหมาย ทดสอบความใชไดของวิธีการในตวอย่างพืชทตดเชื้อใบขาวในแปลง เปรียบเทยบกับวิธี nested-
้
้
้
ี่
PCR ที่ใช้ยีนเป้าหมาย 16S-23S rDNA ทดสอบปริมาณความเขมข้นของยีนทต่ าทสุดทสามารถตรวจไดดวย
ี่
้
ี่
วิธีที่พัฒนาขึ้น
ขั นตอนที่ 2 การพัฒนาเครื่องหมายโมเลกุลใหม่ที่ตรวจจับเชื้อไฟโตพลาสมาโรคใบขาวอ้อย
วิธีด าเนินการทดลอง สืบค้นข้อมูลลาดบเบสของยีน imp ของเชื้อไฟโตพลาสมาสาเหตุโรคในอ้อย

ั
และพืชอื่น ทมีรายงานในฐานข้อมูลสากล (NCBI) เปรียบเทยบข้อมูลลาดบเบส ออกแบบชดไพร์เมอร์ท ี่
ั

ุ
ี
ี่
จ าเพาะต่อการตรวจจับยีน imp ทดสอบสภาวะในการเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอของยีน imp ตรวจผลการทดสอบ
ี

ด้วยเทคนิคอิเลคโตรโฟริซีส ตรวจพิสูจน์ชิ้นดเอ็นเอที่ไดด้วยการวิเคราะห์ลาดับเบส ตรวจความจ าเพาะของ
้
เครื่องหมายโมเลกุลด้วยการทดสอบกับดีเอ็นเอของตัวอย่างใบอ้อยที่มีอาการ SCWL, SCGS และ SCGGS ท ี่

้
ตรวจพิสจน์ชนิดของเชอแลว ตรวจวิเคราะห์ลาดบเบสของชนดเอ็นเอทไดจากการตรวจดวยเชอทง 3 ชนิด
ู
ื้
ี
ิ้
ื้
ั
้
้
ั้
ี่

์
วิเคราะห์ความแตกต่างของลาดับนิวคลิโอไทดที่ได้ หาต าแหน่งแปรปรวน ตรวจความไวของวิธีการด้วยการ
เจือจางพลาสมิดดเอ็นเอลูกผสมทมีชิ้นดีเอ็นเอเป้าหมาย Imp ทดสอบความใช้ไดของวิธีการในตัวอย่างพืชท ี่
ี
ี่
้
ติดเชื้อใบขาวในแปลง เปรียบเทียบกับวิธี nested-PCR ที่ใช้ยีนเป้าหมาย 16S-23S rDNA
การบันทึกข้อมูล
ลาดบนิวคลโอไทดของยีนเป้าหมาย ขนาดความยาวของชนดเอเอทได้จากการเพิ่มปริมาณดเอ็นเอ
ี
ี่

ิ
ี
ิ้
์
ั
้
ด้วยไพร์เมอร์ที่ออกแบบได สภาวะที่เหมาะสมในการเพิ่มปริมาณยีน ความไวของวิธีการ ความจ าเพาะของวิธีการ
สถานที่ทดลอง ศูนย์วิจัยพืชไร่ขอนแก่น
ระยะเวลา ตุลาคม 2561 - กันยายน 2564